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如何練就細(xì)胞計(jì)數(shù)神功?
更新時(shí)間：2022-06-09 瀏覽次數(shù)：2283
01 細(xì)胞計(jì)數(shù)的重要性
對(duì)于大多數(shù)需使用細(xì)胞系的操作，如轉(zhuǎn)染、細(xì)胞融合技術(shù)、冷凍保存和傳代培養(yǎng)等，有必要在操作前對(duì)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行定量。因?yàn)槿绻臃N細(xì)胞的密度過(guò)高，實(shí)驗(yàn)還沒(méi)結(jié)束細(xì)胞就會(huì)出現(xiàn)接觸抑制，影響細(xì)胞狀態(tài)，蛋白的表達(dá)也會(huì)受到影響；但如果密度過(guò)低最后收集到的樣品過(guò)少，檢測(cè)不到，我們要花額外的時(shí)間等待細(xì)胞長(zhǎng)到合適的密度。
使用相同數(shù)量的細(xì)胞將保持最佳生長(zhǎng)，并有助于使用細(xì)胞培養(yǎng)的程序標(biāo)準(zhǔn)化，這反過(guò)來(lái)也使結(jié)果具有更好的再現(xiàn)性。所以細(xì)胞計(jì)數(shù)非常重要，它是一個(gè)實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)。
文章開(kāi)頭提到的血球計(jì)數(shù)板是以往細(xì)胞計(jì)數(shù)常用的方式，它的使用較為耗時(shí)，還易受操作者主觀判斷的影響，并且某些細(xì)胞類型，如形成簇的細(xì)胞類型，難以用這種方法計(jì)數(shù)。
02 Scepter™3.0細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
現(xiàn)有的細(xì)胞計(jì)數(shù)設(shè)備可提供替代的細(xì)胞定量方法，這就包括我們的Scepter™3.0細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。
Scepter™3.0細(xì)胞計(jì)數(shù)儀采用“計(jì)數(shù)金標(biāo)準(zhǔn)"庫(kù)爾特原理。
Scepter感應(yīng)器吸入精確的樣本體積；
細(xì)胞穿過(guò)感應(yīng)器小孔時(shí)，電阻值增加。電阻值的增加導(dǎo)致電壓的增加；
每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)時(shí)引起的電壓的增加作為一個(gè)脈沖被記錄下來(lái)；
用直徑和細(xì)胞數(shù)目繪制直方圖，脈沖的大小代表細(xì)胞的大小，脈沖的數(shù)目代表細(xì)胞的個(gè)數(shù)。
最大的特點(diǎn)是：
計(jì)數(shù)精準(zhǔn)，提供基于細(xì)胞大小的直方圖（如上圖）；
手持式體積小巧；
可以給出細(xì)胞體積；
可以進(jìn)行復(fù)雜的混合型的細(xì)胞計(jì)數(shù)；
計(jì)數(shù)迅速，平均在30秒之內(nèi)完成計(jì)數(shù)（最快14秒）。
03 檢測(cè)范圍與應(yīng)用
基于細(xì)胞直徑以及樣品濃度的感應(yīng)器選擇指南：
樣本濃度范圍 （個(gè)/毫升） | 50,000-1,500,000個(gè)/毫升 | 10,000-500,000個(gè)/毫升 |
直徑范圍(µm) | 4-20 µm | 6-36 µm |
適合測(cè)量的顆粒直徑范圍 | 5-15 | 8-25 |
| 感應(yīng)器規(guī)格 | 40 µm | 60 µm |
|---|
人體細(xì)胞中最小的是血小板，直徑只有約2微米；最大的是成熟的卵細(xì)胞，其直徑在200微米左右，鴕鳥(niǎo)卵細(xì)胞甚至可以達(dá)到長(zhǎng)15～22厘米,直徑14至15厘米。細(xì)胞的直徑和大小會(huì)直接影響覆蓋度百分比，同樣的接種濃度，Cos7和293細(xì)胞最終的覆蓋度有著極大的區(qū)別。
讓我們來(lái)看看在分離PBMC后和流式直接對(duì)比的數(shù)據(jù)：
外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。外周血單個(gè)核細(xì)胞主要的分離方法是Ficoll-hypaque(聚蔗糖－泛影葡胺)密度梯度離心法。
離心獲得PBMC后分別染色通過(guò)流式進(jìn)行分群(Lymphocyte 和Monocyte)和計(jì)數(shù)，ScepterTM3.0的結(jié)果和流式在趨勢(shì)上具有很好的相關(guān)性。
無(wú)論是分群還是計(jì)數(shù)的回歸系數(shù)都達(dá)到了0.98以上。綜上所述，Scepter3.0可以準(zhǔn)確對(duì)PBMC細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分群。
